Úvod
Úroveň imunity proti aktinobacilové pleuropneumonii (dále jen App) je dána především kvalitou použité vakcíny. Rozhodující pro imunogenní účinnost je nejen výběr imunogenů, ale i způsob jejich přípravy a volba použitého adjuvans, popřípadě použití imunomodulans.
Faktory virulence App
Rozhodujícími faktory virulence u aktinobacilové pleuropneumonie jsou APX toxiny. Sérovary 1, 5, 9, 10 a 11 produkují APX I toxin, který je silně hemolytický a slabě cytotoxický. Téměř všechny sérovary produkují APX II toxin; toxin je slabě hemolytický a slabě cytotoxický. Sérovary 2, 3, 4, 6 a 8 produkují APX III toxin, který vykazuje silný cytotoxický účinek.
APX toxiny vytvářejí otvory do buněk erytrocytů a plicních alveolárních makrofágů. Důsledkem je destrukce hematoalveolární bariéry v plicích. Sérovary produkující APX I toxin vyvolávají onemocnění s nejtěžšími klinickými příznaky a se sklonem k perakutnímu průběhu s fatální prognózou. Sérovary produkující APX III toxin vyvolávají většinou lehčí klinické příznaky s chronickým průběhem onemocnění. Při výskytu smíšených infekcí je průběh obvykle těžší než u infekcí vyvolaných jedním sérovarem. Dalším faktorem virulence jsou lipopolysacharidy (dále jen LPS). Jsou součástí vnější membrány bakteriálního těla a obsahují endotoxin s polysacharidovými řetězci. Ty jsou odpovědné za tvorbu specifických protilátek. Na povrchu vnější membrány bakteriálního těla jsou vnější membránové proteiny (dále jen OMP), některé z nich se uplatňují při aktivním transportu železa do bakteriální buňky. Význam mají subtypově nespecifické proteiny v oblasti 42 kDa. K dalším faktorům virulence App patří fimbriové, kapsulární antigeny, enzymy a další.
Faktory chránící proti infekci App
Rozhodující protilátky chránící proti původci aktinobacilového onemocnění jsou zejména toxinneutralizační protilátky proti APX I a APX III toxinům. Tyto protilátky zejména blokují destruující účinek toxinů v plicní tkáni a mohou zabránit úhynu zvířete. Protilátky proti LPS znesnadňují kolonizaci sliznic, umožňují opsonizaci bakterií a jejich následnou destrukci v makrofázích. Protilátky proti LPS jsou v převážné míře sérotypově specifické, proto se uplatňují především proti homologním kmenům App. Vakcinační kmeny by proto měly reflektovat prevalenci nejrozšířenějších sérovarů v České republice. Protilátky proti OMP se uplatňují především jako opsoniny. Jsou společné pro většinu sérovarů a uplatňují se při navození křížové imunity. Protilátky proti kapsulárním antigenům nemají tak důležitou funkci při infekci App, jak se původně předpokládalo. Kapsulární protilátky nezabrání infekci App a indukují pouze částečnou homologní chráněnost, nelze je proto použít ani jako exaktní indikátor úrovně postvakcinační imunity proti App.
Kultivace, zpracování a kvantifikace antigenu ve vakcíně
Vybrané vakcinační kmeny App s vysokou expresí dominantních faktorů patogenity jsou kultivovány ve fermentorech v řízeném režimu pH, pO2, redox potenciálu a v definovaných médiích. Pomnožená bakteriální suspenze je zpracována s použitím metod separace, ultrafiltrace, extrakce a sterilní filtrace. Toxické substance jsou šetrně inaktivovány. Výsledkem je částečně purifikovaný antigen s obsahem subcelulárních frakcí povrchových antigenů a inaktivovaných toxinů. Denzitometricky je změřena koncentrace účinných substancí. Na základě získaných výsledků je imunogen nadávkován do vakcíny. Po kontrole bezpečnosti a účinnosti je vakcína expedována.
Závěr
Pro výrobu bezpečné a účinné vakcíny proti aktinobacilové pleuropneumonii prasat je rozhodující standardizovaný obsah vybraných imunogenů, to je především obsah APX I, APX II a APX III toxoidů a dalších imunogenů obsažených na povrchu bakteriální buňky (OMP, LPS, kapsulární antigeny). Vzhledem k tomu, že některé faktory imunogenity jsou specifické (LPS), měla by být při volbě vakcinačních kmenů zohledněna i prevalence sérotypů na příslušném území.
L. PAŽOUT, P. FLACHSEL, I. KŘENOVÁ
Dyntec, spol. s r. o., Terezín
